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    MTT檢測試劑盒

    產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    MTT檢測試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T人α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒 人ELISA試劑盒96T/48T人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒人ELISA試劑盒96T/48T

    更新時(shí)間:2022-06-20
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    產(chǎn)品分類(lèi)

    PRODUCT CLASSIFICATION

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    公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:

    產(chǎn)品名稱(chēng)英文名稱(chēng)規格貨號
    MTT檢測試劑盒MTT Assay Kit500次LZ-01X6322

    商品介紹:
    MTT廣泛用于檢測細胞生長(cháng),其原理是MTT可以被活細胞線(xiàn)粒體內的脫氫酶還原生成深紫色的formazan結晶,而死細胞則無(wú)此活性。深紫色的formazan結晶被溶解后可以通過(guò)測定490nm波長(cháng)的光吸收而測定出其濃度,并由此推測出細胞的活力,細胞增殖越旺盛,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。
    產(chǎn)品特點(diǎn):
    1.采用*的Formazan溶解液,可以充分溶解formazan,減少誤差。
    2.背景低,靈敏度高,線(xiàn)性范圍寬,重復性好。
    3.本產(chǎn)品為足夠500次(5個(gè)96孔細胞培養板)微孔板檢測。
    4.可用于生物活性因子活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗、腫瘤放射敏感性測定等。

    存條件:低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存),有效期一年。
    使用方法:
    下面操作是檢測細胞毒性的試驗,其他應用跟此類(lèi)似或更簡(jiǎn)單(如生長(cháng)曲線(xiàn)試驗),操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可,故不再贅述。
    ㈠、接種細胞
    1.按常規消化法消化匯合的單層細胞,收集到含血清的培養基中。
    2.200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
    3.用培養基重懸細胞沉淀,制備成單細胞懸浮液并計數。
    4.將細胞稀釋到2.5×103個(gè)/mL~5×10個(gè)/mL之間(需要根據細胞的生長(cháng)速度決定),如果不知道生長(cháng)數度,一般可以稀釋到1×10個(gè)/mL。
    5.將足夠量的細胞懸液轉移到培養皿中(便于用排槍取樣)。一個(gè)96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
    6.用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞,則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養基(總體積為200μL)。注意:一定要把細胞加在孔的正中,否則細胞會(huì )聚集在孔的角落處,影響試驗。
    7.用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養基。第1 列各孔將作為+培養基-細胞+MTT對照(用于測OD時(shí)調零),第12列加培養基的作用是減少邊緣效應對第11 列反應的影響。
    8.按常規細胞培養方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天,使細胞進(jìn)入指數生長(cháng)期。
    ㈡、藥物處理
    9.用培養基將藥物稀釋到8個(gè)待測濃度(如果不知道待測濃度,則需要預試驗確定),一般一種藥物需要做3塊平行板。
    10.去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養基(不要觸動(dòng)細胞),保留第1 列和第12列各孔中的培養基。
    11.在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養基,這些孔將作為+培養基+細胞-藥物的對照。
    12.在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個(gè)濃度梯度的待測藥物,每列加入一個(gè)濃度的藥物。
    13.按常規方法把96孔板繼續放在在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時(shí)間,此段時(shí)間即為藥物處理細胞的時(shí)間,由用戶(hù)自己決定。
    14.處理結束后去除第2 到第11列(共10列,均含細胞)所有孔中的培養基,并再加入100μL新鮮培養基。
    15.每天換培養使細胞數量擴增2-3倍(所需時(shí)間隨細胞不同而不同)。
    ㈢、存活細胞計數
    16.在生長(cháng)末期,去除第1到第11列各孔中的培養基后,再加入100μL新鮮培養基和10μL溶液A(含MTT成分),用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續培養4-8小時(shí)。注意:溶液A在低溫情況下會(huì )凝固,使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解,搖勻后使用。MTT有致癌性,一定要帶手套操作。
    17.小心吸棄孔內培養基(含溶液A)。由于培養基可能會(huì )影響光吸收,最好盡可能去除。
    18.每孔加入100μL溶液B,置搖床上低速振蕩10分鐘,使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
    19.由于產(chǎn)物不穩定,故需要立即在酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
    ?注意:用第1 列各孔(+培養基-細胞+MTT對照)調零。
    20.計數同樣處理的各次重復的平均值。
    21.以藥物濃度為橫軸,以吸光度為縱軸繪制曲線(xiàn)。由于各處理吸光度絕對值差別很大,一般需將其轉化成生長(cháng)抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數據的平均數作為100%),這樣便于計算出IC50,用于各種藥物處理效果的比較。注意:如果測生長(cháng)曲線(xiàn),則以時(shí)間為橫軸。正常生長(cháng)曲線(xiàn)一般呈現S型,具有促進(jìn)作用的則斜率加大。

    注意事項:
    ①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
    ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
    ③按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
    ④底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
    ⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
    ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
    ⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
    ⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
    ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

    實(shí)驗步驟:
    (1)實(shí)驗開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
    (2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
    (3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
    (4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
    (5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
    (6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
    (7)10,000rpm,4℃離心20min
    (8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
    (9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
    (10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
    (11)12,000rpm,4℃離心20 min
    (12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
    (13)加200ul的DEPC處理水溶解
    (14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
    (在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數)

    人CD14分子(CDl4)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人CD30分子(CD30)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人chemerin ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人CXC趨化因子受體1(CXCR1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人C多肽(CP) ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    XY-E11196    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人D-乳酸脫氫酶(D-LDH) ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人D二聚體(D2D)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人EB病毒IgM(EBv IgM)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人E鈣粘著(zhù)蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人α-內肽(α-EP)ELISA試劑盒    人ELISA試劑盒    96T/48T    

    人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒      人ELISA試劑盒    96T/48T    Caspase 9 活性檢測試劑盒    

    Caspase抑制劑(Z-VAD-FMK)    

    Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)    

    線(xiàn)粒體膜電位檢測試劑盒    

    羅丹明123    

    CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒    

    細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)    

    Ad-GFP-LC3B    

    Ad-mCherry-GFP-LC3B    

    DAPI溶液(5mg/ml)    

    DAPI染色液    

    Hoechst 33258細胞藍色熒光染料    

    Hoechst 33258染色液    

    Hoechst 33342細胞藍色熒光染料    

    Hoechst 33342染色液    

    活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)    

    細胞活力檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)    

    碘化丙啶    

    Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒    

    細胞周期與凋亡檢測試劑盒    

    Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒    

    Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒    

    Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒    

    Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒    

    Annexin V-PE細胞凋亡檢測試劑盒    

    MTT檢測試劑盒Annexin V-PE/7-AAD雙染細胞凋亡檢測試劑盒    

    Annexin V-APC細胞凋亡檢測試劑盒    

    Annexin V-APC/7-AAD雙染細胞凋亡檢測試劑盒    

    操作程序:

    注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過(guò)度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

    1.玻片的處理:一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

    2.細胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長(cháng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

    3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

    4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

    5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

    6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

    7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。

    8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護膜揭開(kāi)后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據雜交情況可以調節)。

    9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

    10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗

    11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

    12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

    13.滴加化過(guò)氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

    14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

    15.必要時(shí)蘇木素復染,充分水洗。

    16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。


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